RNA的提取方法步骤及原理

RNA抽取一般使用Trizol法抽提:

Trizol是一种总RNA抽提试剂，内含异硫氰酸胍等物质，能迅速裂解细胞，抑制细胞释放出的核酸酶活性。目前常用Trizol法进行提取组织或细胞中的RNA。

Trizol作用原理:

在匀质化或溶解样品中，Trizol试剂可保持RNA的完整性，同时能破坏细胞及溶解细胞成分。加入氯仿离心后，裂解液分层成水相和有机相。RNA存在于水相中。

水相转移后，RNA通过异丙醇沉淀回收。移去水相后，用乙醇可从中间相沉淀得到DNA，加入异丙醇沉淀可从有机相得到蛋白质。

RNA提取的一般步骤包括样本处理、裂解、去除DNA和蛋白质、纯化和评估等。

以下是一般提取RNA的步骤：

1.采集样品。RNA可以从各种生物学样品中获得。

2.裂解。样品裂解以释放RNA。裂解剂可以是化学品，物理方法（例如超声波处理，珠研磨器），或酵素。RNA的有效裂解通常是RNA提取的最重要步骤之一。

3.去除DNA和蛋白质。在纯化RNA之前，必须从RNA中去除DNA和多余的蛋白质。去除DNA的步骤包括DNase处理，或用nuclease-free Buffer洗涤。去除蛋白质的步骤包括用酸性Buffer洗涤、钠离子膨胀液(低pH)洗脱或亚硫酸钠脱细胞质净化。

4.纯化RNA。RNA可以通过凝胶过滤，离心或离子交换纯化方法纯化。

5.评估 RNA 。纯化的RNA可以用吸光光度计或电泳进行测量。吸光光度法超过260纳米的RNA的吸收峰，而RNA的260纳米吸收与RNA含量成正比。用电泳分析可以确定RNA的大小、完整性和纯度。

RNA提取的原理：

RNA分子本身比DNA分子更易于降解或附着到其他生物分子或表面。因此，在提取RNA时必须谨慎地处理，以避免RNA的降解或沉淀。RNA提取需要裂解样品细胞或组织细胞，以使RNA完全裸露。裂解的样品要通过不变质和造成RNA的毁坏的最少化。裂解的样品中还可能会存在其他核酸，如DNA，RNA二聚体，RNA三聚体、RNA蛋白复合物。通过添加洗脱剂、上样前预浸的亲疏水性列上进行分离。最后，纯化的RNA需要评估RNA的大小、完整性和纯度。