pcr石蜡怎么除去

誓言任风吹 2个月前 已收到1个回答 举报

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在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。

10×PCR buffer

5 μl dNTP mix (2mM)

4 μl 引物1(10pM)

2 μl 引物2(10pM)

2 μl Taq酶 (2U/μl)

1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)

1 μl 加ddH2O至 50 μl。

视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。

2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,最后在72℃ 保温7min。

3.结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4.PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μl氯仿进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测

5小时前

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