只你不爱 2星
共回答了253个问题采纳率:90.1% 评论
在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl。
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,最后在72℃ 保温7min。
3.结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4.PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μl氯仿进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测
5小时前
猜你喜欢的问题
16天前2个回答
16天前3个回答
16天前2个回答
16天前2个回答
16天前1个回答
16天前1个回答
热门问题推荐
3个月前1个回答
1个月前1个回答
2个月前1个回答
3个月前1个回答
1个月前1个回答
1个月前1个回答
3个月前3个回答
1个月前1个回答
1个月前1个回答