亚硝酸盐检测方法及步骤

   食品中亚硝酸盐的快速检测-盐酸萘乙二胺法

1　范围

本方法规定了食品中亚硝酸盐的快速检测方法。 

本方法适用于肉及肉制品（餐饮食品）中亚硝酸盐的快速测定。

2　原理

样品中的亚硝酸盐经提取后，在弱酸性条件下与对氨基苯磺酸重氮化后，再与盐酸萘乙二胺反应生成紫红色偶氮化合物，其颜色的深浅在一定范围内与亚硝酸盐含量成正相关，通过色阶卡进行目视比色，对样品中亚硝酸盐进行定性判定。

3　试剂和材料

除另有规定外，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的二级水。

3.1　试剂

3.1.1　对氨基苯磺酸。

3.1.2　盐酸萘乙二胺。

3.1.3　盐酸。

3.1.4　盐酸（20%）：量取20mL盐酸，用水稀释至100mL。

3.1.5　对氨基苯磺酸溶液（4g/L）：称取0.4g对氨基苯磺酸，溶于100mL20%盐酸中，混匀，置棕色瓶中，临用新制。

3.1.6　盐酸萘乙二胺溶液（2g/L）：称取0.2g盐酸萘乙二胺，溶解于100mL水中，混匀，置棕色瓶中，临用新制。

3.2　参考物质

亚硝酸钠参考物质中文名称、英文名称、CAS号、分子式、相对分子质量见表1，纯度≥99%。

表1 亚硝酸钠中文名称、英文名称、CAS登记号、分子式、相对分子质量

中文名称

英文名称

CAS登录号

分子式

相对分子质量

亚硝酸钠

Sodiumnitrite

7632-00-0

NaNO2

69.00

3.3　标准溶液配制

亚硝酸钠标准工作液（200µg/mL，以亚硝酸钠计）：精密称取适量经110℃—120℃干燥恒重的亚硝酸钠参考物质（3.2），加水溶解，移入250mL容量瓶中，加水稀释至刻度，混匀。

3.4　材料

亚硝酸盐快速检测试剂盒：适用基质为肉及肉制品，需在阴凉、干燥、避光条件下保存。

4　仪器和设备

4.1　移液器：200µL，1mL

4.2　涡旋混合器或超声仪

4.3　电子天平或手持式天平：感量为0.01g和0.0001g

4.4　离心机

4.5　微孔滤膜：0.45μm（水系）

5　分析步骤

5.1　试样制备

取适量有代表性样品的可食部分，充分粉碎混匀。

5.2　试样的提取

准确称取试样1g（精确至0.01g），置于离心管中，准确加水10mL，超声或涡旋振荡提取5min，静置10min。准确吸取1mL上清液（如样品浑浊，≥3000r/min离心5min取上清液，或经微孔滤膜过滤后取续滤液）于检测管中，向检测管中滴加对氨基苯磺酸溶液200μL，混匀静置1min，再加入盐酸萘乙二胺溶液100μL，混匀静置5min，即得待测液。

5.3　测定步骤

将待测液与标准色阶卡目视比色，10min内判读结果。进行平行试验，两次测定结果应一致，即显色结果无肉眼可辨识差异。

5.4　质控试验

每批样品应同时进行空白试验和质控样品试验（或加标质控试验）。用色阶卡和质控试验同时对检测结果进行控制。

5.4.1　空白试验

称取空白样品，按照5.2和5.3步骤与样品同法操作。

5.4.2　质控样品试验（或加标质控试验）

亚硝酸盐质控样品：采用典型样品基质或相似样品基质按照实际生产工艺生产的，含有一定量亚硝酸盐，并可稳定保存的样品。经参比方法确认的质控样品中亚硝酸盐含量（以亚硝酸钠计）应包括但不限于10mg/kg。

加标质控样品：准确称取空白试样1g（精确至0.01g），置于离心管中，加入适量亚硝酸钠标准工作液（200µg/mL）（3.3）使样品中亚硝酸钠含量为10mg/kg。

质控样品（或加标质控样品）按5.2和5.3步骤与样品同法操作。

6　结果判定要求

观察检测管中样液颜色，与标准色阶卡比较判读样品中亚硝酸盐（以亚硝酸钠计）的含量。颜色浅于检出限（1mg/kg）则为阴性样品；颜色深于10mg/kg则为阳性样品。色阶卡见图1。

注：1.颜色接近或深于1mg/kg，但浅于或接近10mg/kg时，则考虑本底污染或带入所   2.10mg/kg仅作为本方法的本底控制限。

                       图1 亚硝酸盐色阶卡

质控试验要求：空白试验测定结果应为阴性，质控样品试验测定结果应在其标示量值允差范围内，加标质控试验测定结果应与加标量相符。

7　结论

由于色阶卡目视判读存在一定误差，为尽量避免出现假阴性结果，读数时遵循就高不就低的原则。当测定结果大于10mg/kg时，应对结果进行确证。

8　性能指标

8.1　检测限：1mg/kg。

8.2　灵敏度：灵敏度应≥99%

8.3　特异性：特异性应≥85%。

8.4　假阴性率：假阴性率应≤1%。

8.5　假阳性率：假阳性率应≤15%。

注：性能指标计算方法见附录A。

9　其他

本方法所述试剂、试剂盒信息及操作步骤是为给方法使用者提供方便，在使用本方法时不作限定。方法使用者在使用替代试剂、试剂盒或操作步骤前，须对其进行考察，应满足本方法规定的各项性能指标。

本方法参比方法为GB 5009.33-2016《食品安全国家标准食品中亚硝酸盐与硝酸盐的测定—第二法分光光度法》。

待测样品中若存在高含量的亚硫酸氢钠、抗坏血酸或酱油时，会对本法的显色结果产生一定影响，检测时应予以注意。

色阶卡应确保在试剂盒保质期内不出现褪色或变色的情况。