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PCR扩增体系主要由引物，酶，dNTP，模板，Mg2+等基本要素组成。
(一) PCR扩增原理
PCR(Polymerase ChainReaction) ， 即聚合酶链反应， 是由Kary Mullis等人首创的一项体外快速扩增DNA的方法， 它可使极微量的某一特定序列的DNA片段在数小时内特异性扩增至百万倍以上。PCR扩增DNA通常由20~40个PCR循环组成。
每个循环由高温变性、低温退火、适温延伸3个步骤组成。高温时， DNA变性，氢键打开，双链变为单链以作为扩增的模板；低温时，一对引物(即左端引物和右端引物) 分别与模板DNA的2条单链特异性互补结合， 即退火；
然后适温时， 在DNA聚合酶介导下， 将4种三磷酸脱氧核苷(dATP、dTTP、dGTP、dCTP) 按碱基互补配对原则不断添加到引物末端， 按5'→3'方向将引物延伸自动合成新的DNA链， 使DNA重新变成双链。将合成的DNA双链不断重复以上的变性、退火、延伸过程， 则左、右引物间这段DNA的量就可指数倍增加。
若重复进行这一反应n次， 从理论上讲原始的DNA数量可以被扩增为原来的2”倍， 因此DNA的量在短时间内特异性地获得了极度的放大。
21小时前
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