trap染色切片制作步骤

骨组织切片及trap染色实验步骤

1、 骨组织脱钙：新鲜骨组织固定于4%多聚甲醛24h以上。将组织从固定液取出置于EDTA脱钙液内脱钙（不能用含酸的脱钙液脱钙），每3天换一次脱钙液，至骨组织针扎可以顺利通过为止。

2、 取材：在通风橱内用手术刀将目的部位组织修平整，将修切好的组织和对应的标签放于脱水盒内。

3、 脱水：将脱水盒放进吊篮里于脱水机内依次梯度酒精进行脱水。75%酒精4h-85%酒精2h-90%酒精2h-95%酒精1h-无水乙醇I 30min-无水乙醇II 30min-醇苯5-10min-二甲苯I 5-10min-二甲苯II 5-10min-蜡I 1h-蜡II 1h-蜡III 1h。

4、 包埋：将浸好蜡的组织于包埋机内进行包埋。先将融化的蜡放入包埋框，待蜡凝固之前将组织从脱水盒内取出按照包埋面的要求放入包埋框并贴上对应的标签。于-20°冻台冷却，蜡凝固后将蜡块从包埋框中取出并修整蜡块。

5、 切片：将修整好的蜡块置于石蜡切片机上切片，片厚4μm。 切片漂浮于摊片机40℃ 温水上将组织展平，用载玻片将组织捞起，并放进60℃ 烘箱内烤片。待水烤干蜡烤化后取出常温保存备用。

6、 石蜡切片脱蜡至水：依次将切片放入二甲苯Ⅰ20min-二甲苯Ⅱ20min-无水乙醇Ⅰ10min-无水乙醇Ⅱ10min-95%酒精5min-90%酒精5min-80%酒精5min-70%酒精5min-蒸馏水洗。

7、 染液配制：A液：0.1mol/L醋酸缓冲液PH5.0：醋酸钠1.3608g+蒸馏水100ml溶解，用冰醋酸调PH值到5.0。B液：六偶氮副品红 4%亚硝酸钠：2g亚硝酸钠+去离子水50ml

副品红溶液：副品红2.5g+去离子水50ml+浓盐酸7.5ml，加热至90°溶解后过滤，4°棕色瓶保存。临用前4%亚硝酸钠与副品红溶液等比例混合。