荧光pcr技术的基本原理和过程

荧光PCR技术是一种基于聚合酶链反应（PCR）的方法，用于检测和定量DNA的存在。它利用荧光探针与目标DNA序列结合，通过PCR扩增产生荧光信号。基本过程包括：

1.反应混合物中加入荧光探针、引物和DNA模板；

2.进行PCR扩增，荧光探针与目标DNA序列结合；

3.在PCR过程中，荧光探针被酶切释放，产生荧光信号；

4.通过荧光检测仪测量荧光信号强度，定量目标DNA的存在。荧光PCR技术具有高灵敏度、高特异性和高准确性的优点，广泛应用于基因表达分析、病原体检测等领域。

基本原理:

荧光PCR技术，是指在普通PCR技术的基础上，在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。

主要有两种方法及过程：

1、SYBR Green 染料法

SYBR能够结合到双链DNA上面，当系统中的模板被扩增时，SYBR能够有用结合到新组成的双链上面，跟着PCR的进行，结合的SYBR燃料越来越多，被仪器检测到的荧光信号越来越强，然后到达定量的意图。在PCR反应体系中，加入过量SYBR荧光染料，SYBR荧光染料特异性地掺入DNA双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的SYBR染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与PCR产物的增加完全同步。

2、TaqMan探针法：

PCR扩增时在参加一对引物的一起参加一个特异性的荧光探针，该探针为一寡核苷酸，两头分别标记一个陈述荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时，陈述基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；刚开始时, 探针结合在DNA恣意一条单链上;PCR扩增时，Taq酶的5’端－3’端外切酶活性将探针酶切降解，使陈述荧光基团和淬灭荧光基团别离，然后荧光监测系统可接收到荧光信号，即每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子形成，完成了荧光信号的累积与PCR产品形成彻底同步。