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M9培养基是一种培养大肠杆菌的培养基。具体配方及配置方法如下：
NH4Cl 0.5g
Na2HPO4 3.0g
KH2PO4 1.5g
将以上各组分溶于400毫升蒸馏水中，用1mol/l的NaOH溶液调整pH到7.4，再加纯水将整体积调整至494毫升，然后把液体置入一个1升烧瓶中，送去灭菌。
继续制备以下溶液各50毫升，并放在有盖子的瓶子内:
1mol/l MgSO4.7H2O溶液
20% (w/v) 葡萄糖溶液
1mol/l CaCl2溶液
将上述所有溶液分别进行灭菌消毒，在无菌情况下向配好的溶液内加入MgSO4溶液1毫升，5ml葡萄糖溶液及50ml的氯化钙溶液即可。
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